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以下由武漢泰特沃斯科技有限公司色譜技術(shù)人員主要介紹利用氣相色譜儀同時(shí)測定食品中植物甾醇和膽固醇含量的分析方法，測定植物甾醇含量較高的常見植物油和同時(shí)含有膽固醇及植物甾醇的樣品?，F(xiàn)如今氣相色譜技術(shù)已相對(duì)成熟，但是國內(nèi)外相關(guān)儀器廠家仍然不斷推出性能更穩(wěn)定、功能更全面、自動(dòng)化程度更高的氣相色譜儀，特別是國產(chǎn)色譜儀的進(jìn)步更加明顯，國產(chǎn)氣相色譜儀具有較高的市場占有率，武漢泰特沃斯科技有限公司，是氣相色譜儀供應(yīng)商。

植物甾醇是存在于植物中的一大類化學(xué)物質(zhì)的總稱，其化學(xué)結(jié)構(gòu)是與膽固醇相似的一類甾體化合物，幾乎存在于所有的植物性食物中，常見的包括β-谷甾醇、菜油甾醇、豆甾醇，其次是這些植物甾醇的飽和形式，即谷甾烷醇和豆甾烷醇等。植物甾醇與膽固醇結(jié)構(gòu)類似，而生理學(xué)作用卻相差甚遠(yuǎn)。大量流行病學(xué)資料和實(shí)驗(yàn)室研究證明，人體血清膽固醇增高，易增加心血管疾病的患病幾率。而攝入較多的植物甾醇與人群許多慢性病的發(fā)生率較低有關(guān)，如降低高膽固醇血癥、冠狀動(dòng)脈硬化性心臟病、癌癥等疾病的危險(xiǎn)性。人體內(nèi)不能合成植物甾醇，也不能由膽甾醇轉(zhuǎn)化而成，只能由食物中攝取。植物甾醇廣泛存在于植物中，在種子、植物油、蔬菜、水果等含量較多。自然界中常見、含量很多的是β-谷甾醇、菜油甾醇、豆甾醇、豆甾烷醇等。

目前對(duì)膽固醇和植物甾醇的測定方法有分光光度計(jì)法、酶法、液相色譜法、薄層色譜法、氣相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜法等。如比色法樣品前處理需要提取樣品中的脂肪，且容易受到其他甾醇和甘油三酯的干擾，造成結(jié)果的顯著偏大。操作繁雜、誤差大、重復(fù)性差，僅適用于動(dòng)物性食品。酶法技術(shù)含量較高，特異性強(qiáng)，僅適用于動(dòng)物性食品。液相色譜法采用波長205～210 nm檢測，如此低的檢測波長使得待測組分不能與實(shí)際樣品中的基體完全分離，而干擾其準(zhǔn)確定量。氣相色譜法的選擇性較高，分離效果好。氣相色譜-質(zhì)譜法操作復(fù)雜，耗費(fèi)更大。

本實(shí)驗(yàn)定量采用內(nèi)標(biāo)法，是一種間接、相對(duì)的校準(zhǔn)方法，通過測量內(nèi)標(biāo)物及被測組分的峰面積的相對(duì)值來進(jìn)行計(jì)算，因而在一定程度上能校正和消除操作條件對(duì)分析結(jié)果產(chǎn)生的影響，提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確度。色譜條件對(duì)結(jié)果影響不大，準(zhǔn)確度、精度較高，可克服進(jìn)樣量的誤差對(duì)測量結(jié)果的影響，比較適用于多成分的測定方法。

因此有必要建立簡便、靈敏度和準(zhǔn)確度較好的固醇類分析方法，有效分離并測定植物甾醇和膽固醇的含量，對(duì)估計(jì)居民攝入量有重要意義，也為科學(xué)指導(dǎo)居民膳食提供依據(jù)。

1 儀器與設(shè)備

氣相色譜儀（配氫火焰離子化檢測器）；萬分之一天平；磁力攪拌電熱套；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、分液漏斗振蕩器。

2 方法

2.1 色譜條件

毛細(xì)管色譜柱（25 m×0.32 mm，0.17 μm）；氫火焰離子化檢測器；升溫程序：柱溫210 ℃，以12 ℃/min升至300 ℃，保持12.5 min；進(jìn)樣口溫度270 ℃；檢測器溫度280 ℃；氫氣流速40 mL/min；空氣流速400 mL/min；進(jìn)樣量1 µL；分流比30∶1。

2.2 樣品制備

稱取適量樣品于皂化瓶中，依次加入2.0 mg/mL內(nèi)標(biāo)物（5α-膽甾烷）、40 mL體積分?jǐn)?shù)95%乙醇溶液、8 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)50% KOH溶液，將皂化瓶置于磁力攪拌電熱套中，連接冷凝裝置，回流冷凝（60±10）min，輕搖試樣保證完全皂化?；亓骼淠Y(jié)束后，關(guān)閉熱源，冷凝管上端加入60 mL體積分?jǐn)?shù)95%乙醇溶液。保持磁力攪拌，15 min后，將皂化瓶從冷凝管移下，冷卻至室溫。皂化液中加入100 mL乙醚溶液，將溶液轉(zhuǎn)移至500 mL干凈的分液漏斗中。加入110 mL 1 mol/L KOH溶液輕輕振搖，待分層清洗后，棄水層。加入40 mL 0.5 mol/L KOH溶液到分液漏斗，輕輕振搖10 s，棄去水層。用40 mL水清洗乙醚層溶液，待分層后棄去水相。反復(fù)水洗至少3 次。完成水洗后，將乙醚層從分液漏斗上通過有玻璃棉和20 g無水硫酸鈉的玻璃漏斗轉(zhuǎn)移到錐形燒瓶中，并于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（55±3） ℃條件下，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至無水。正庚烷5 mL定容，取適量于進(jìn)樣瓶中，上機(jī)分析。

2.3 內(nèi)標(biāo)溶液配制

精確稱取5α-膽甾烷100 mg于50 mL容量瓶，正庚烷溶解定容，得到2.0 mg/mL的內(nèi)標(biāo)溶液。

3 數(shù)據(jù)處理

采用氣相色譜法對(duì)待測組分進(jìn)行測定，根據(jù)保留時(shí)間定性，峰面積定量。以5α-膽甾烷為內(nèi)標(biāo)參比計(jì)算膽固醇和植物甾醇的含量。

本實(shí)驗(yàn)優(yōu)化了樣品前處理?xiàng)l件，利用氣相色譜儀，采用毛細(xì)管色譜柱對(duì)膽固醇和植物甾醇進(jìn)行分離，內(nèi)標(biāo)法定量。研究結(jié)果顯示在同時(shí)含有植物甾醇和膽固醇的樣品中，應(yīng)用此方法能夠?qū)⑵溥M(jìn)行良好的分離及定量，且膽固醇和植物甾醇各組分的線性及回收率結(jié)果良好。數(shù)據(jù)結(jié)果表明在常見植物油中一般不含膽固醇或含量很低；植物甾醇總含量高的是玉米油，其次是樹莓籽油、米糠油、菜籽油；植物甾醇分布方面通常是β-谷甾醇含量高，其次是菜油甾醇。

該方法相較于液相色譜法以及氣相色譜-質(zhì)譜法能有效將膽固醇和植物甾醇進(jìn)行分離，具有步驟簡單、重復(fù)性好、準(zhǔn)確度和靈敏度高等特點(diǎn)。