如何讀懂色譜圖
如何讀懂色譜圖
色譜圖是指樣品流經(jīng)色譜柱分離的各組分在檢測(cè)器中形成的檢測(cè)信號(hào)隨時(shí)間分布的信號(hào)-時(shí)間曲線,也稱為色譜流出曲線。色譜圖的縱坐標(biāo)為檢測(cè)器的響應(yīng)信號(hào),橫坐標(biāo)為時(shí)間、體積或距離。色譜圖是色譜儀檢測(cè)定性定量分析樣品的重要依據(jù),色譜圖顯示的保留時(shí)間及峰高可以作為色譜儀實(shí)現(xiàn)定性分析的依據(jù),色譜峰所包羅的峰面積可作為定量分析的依據(jù)。因此,了解色譜圖的各項(xiàng)參數(shù)便可得出準(zhǔn)確有效的檢測(cè)結(jié)果。
色譜峰(peak):檢測(cè)器對(duì)每個(gè)組分所給出的信號(hào),在記錄儀上表現(xiàn)為一個(gè)個(gè)的峰,稱為色譜峰。色譜峰上的極大值是定性分析的依據(jù),而色譜峰所包羅的面積則取決于對(duì)應(yīng)組分的含量,故峰面積是定量分析的依據(jù)。正常色譜峰近似于對(duì)稱形正態(tài)分布曲線,在檢測(cè)過(guò)程中,由于操作不當(dāng)會(huì)引起色譜儀出峰異常的現(xiàn)象,會(huì)出現(xiàn)不對(duì)稱峰或是鬼峰現(xiàn)象。
基線(base line):經(jīng)流動(dòng)相沖洗,柱與流動(dòng)相達(dá)到平衡后,檢測(cè)器測(cè)出一段時(shí)間的流出曲線。一般應(yīng)平行于時(shí)間軸。色譜儀器運(yùn)行時(shí),由于檢測(cè)條件的變化,會(huì)引起的信號(hào)線的位置發(fā)生變化,稱為基線漂移。
噪音(noise):基線信號(hào)的波動(dòng)。通常因電源接觸不良或瞬時(shí)過(guò)載、檢測(cè)器不穩(wěn)定、流動(dòng)相含有氣泡或色譜柱被污染所致。
漂移(drift):基線隨時(shí)間的緩緩變化。主要由于操作條件如電壓、溫度、流動(dòng)相及流量的不穩(wěn)定所引起,柱內(nèi)的污染物或固定相不斷被洗脫下來(lái)也會(huì)產(chǎn)生漂移。
拖尾因子(tailing factor,T):用以衡量色譜峰的對(duì)稱性,也稱為對(duì)稱因子或不對(duì)稱因子?!吨袊?guó)藥典》規(guī)定T應(yīng)為0.95~1.05。T<0.95為前延峰,T>1.05為拖尾峰。
峰底:基線上峰的起點(diǎn)至終點(diǎn)的距離。
峰高(peak height,h):峰的最高點(diǎn)至峰底的距離。
峰寬(peak width,W):峰兩側(cè)拐點(diǎn)處所作兩條切線與基線的兩個(gè)交點(diǎn)間的距離。W=4σ
半峰寬(peak width at half-height,Wh/2):峰高一半處的峰寬。Wh/2=2.355σ
標(biāo)準(zhǔn)偏差(standard deviation,σ):正態(tài)分布曲線x=±1時(shí)(拐點(diǎn))的峰寬之半。正常峰的拐點(diǎn)在峰高的0.607倍處。標(biāo)準(zhǔn)偏差的大小說(shuō)明組分在流出色譜柱過(guò)程中的分散程度。σ小,分散程度小、極點(diǎn)濃度高、峰形瘦、柱效高;反之,σ大,峰形胖、柱效低。